Whole blood freezing for receptor occupancy analysis in international multicenter clinical trials

全血冷冻用于国际多中心临床试验的受体占位分析

在创新药研发与临床免疫监测的征途中，受体占位（Receptor Occupancy, RO）检测犹如一把精准的“标尺”，帮助研究者量化药物与靶点的结合程度，从而指导剂量设定与评估生物效应。然而，传统的RO检测往往受限于新鲜全血样本的苛刻要求——从采血到上机必须在极短的时间内完成。这种“与时间赛跑”的模式，不仅给多中心临床试验的样本流转带来巨大挑战，也增加了患者的采血负担。幸运的是，本司探索出全血样本冷冻保存的方法，使冷冻后的全血样本进行RO检测成为现实，为临床样本的标准化与集中化管理提供了破局之道。

冷冻全血：流式检测的 “特殊样本”

在理想状态下，流式细胞术分析使用新鲜采集的全血样本无疑是最佳选择，能最大程度保证细胞的原始状态和活性，获取最准确、最鲜活的细胞信息 。但在现实的临床实践中，“理想很丰满，现实却很骨感”。多中心实验中，样本来自不同地区、甚至不同的国家，难以做到所有样本都能在非冻存样本的稳定期内运送到中心实验室进行检测。这些情况下，冷冻全血样本成为了一种必要的选择。把全血样本冷冻起来，就像是按下了时间的 “暂停键”，能在一定程度上保存细胞的特征，让我们在后续需要的时候，依然可以对其进行流式检测分析，挖掘其中蕴含的生物学信息。

冷冻全血做RO检测的挑战与应对

冷冻的全血标本，传统观念认为它并不适用于流式检测。主要原因在于，当全血被冷冻时，细胞内的水分会形成冰晶 。冰晶的体积比水大，在细胞内不断生长，就如同一个个尖锐的 “小刺”，会对细胞结构造成严重破坏，导致细胞膜破裂、细胞器受损等。特别是对于流式检测至关重要的细胞表面标志物，冰晶的破坏可能使其结构改变或脱落，使得后续染色时抗体无法准确结合，从而无法得到准确的检测结果。例如，有研究表明，冷冻后的全血细胞在进行流式检测时，细胞的光散射特性会发生明显变化，导致细胞的识别和分类出现偏差，严重影响检测的可靠性。所以，在过去，全血冷冻一直被视为流式检测的 “禁区”。

打破常规-全血冷冻后做流式RO检测的探索

在RO检测中，由于使用的是特异性识别“游离受体”与“药物-受体复合物”的配对抗体，只要冻存过程未造成靶点表位的严重破坏或空间构象的不可逆改变，RO的量化结果便具有高度的可靠性。本司对传统细胞冻存液的配方进行改良，搭配程序降温盒进行缓慢降温，成功实现了全血的长期稳定冷冻保存。对于长期冻存（如数周至数月）的全血样本，其复苏后的细胞活力与抗原表达能够维持在可接受范围内。

冷冻全血在RO检测中的科学验证

本司采用两例新鲜健康供者的全血进行药物预处理，分为高浓度、中浓度、低浓度三组。取部分药物预处理后的全血于当天进行RO检测，其结果作为基线。剩余全血与改良后的细胞冻存液1：1混合，置于程序降温盒后放入-80℃冰箱进行缓慢降温，过夜后冷冻全血置于-80℃冰箱或液氮中长期储存。之后分别于冻存后3天、1个月、3个月和6个月取出全血再次进行RO检测，其结果与基线进行相对误差（%RE）的比较，%RE≤25则通过接受标准。实验结果显示，两个健康供者全血进行三个药物浓度预处理的样本进行冷冻后再次检测RO，与基线相比所有RO结果均通过接受标准，目前显示全血最长冷冻可保存6个月。这意味着，临床站点采集的全血样本无需立即处理，而是可以安全地冻存并集中转运至中心实验室，极大地提升了多中心临床研究的可行性。

总结

全血样本的冷冻保存技术，正在重塑临床流式RO检测的格局。它不仅是一项技术的革新，更是临床试验运营模式的优化。通过打破样本处理的时空壁垒，我们能够在保证数据科学严谨性的前提下，让前沿的免疫监测技术更广泛、更便捷地惠及每一位受试者，为新药的精准研发保驾护航。

关于康维讯生物

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康维讯生物团队累积了多年的生物分析经验，将坚持“推动生物行业发展，助力新药研发”的使命，以助力创新型药物上市为己任，致力于成为全球药企生物分析最值得信赖的合作伙伴。康维讯生物以创新技术为基石，提供质高价优、符合全球监管机构要求的生物分析服务，助力药物研发企业降低研发成本，提高申报成功率，加速申报进程。

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