Share | Key Discovery in Biologics: The “TRUTH” About The Stability of Anti-drug Antibody Samples

研究一：抗胰岛素抗体的“抗压测试”（诺和诺德，2024）

主角：76例糖尿病患者的血清样本（含抗胰岛素抗体），最长储存6.3年。

结论：以2/3样本的前后测量值的差异是否＜30%为接受标准（以ISR接受标准为参考），样本在室温22℃，冰箱4℃，4次冻融，干冰速冻4小时，以及6.3年-20℃的储存条件下，ADA样本均稳定。测试场景，细节见下：

短期稳定性

室温（22℃）3天：将50 μL样本与100 μL 375 mM乙酸（pH = 2.5）混合，在室温下以50转/分钟低速振荡1小时，解离药物-ADA复合物后进行检测。结果显示，12例样本中仅1例低滴度样本（2.8%结合率）波动稍大（+35.7%），其他样本差异绝对值均＜30%。

冰箱（4℃）2周：所有样本复测值波动＜25%，高滴度样本（如46%结合率）复测误差＜10%。

干冰速冻4小时：模拟紧急运输条件，样本信号与新鲜样本一致（如结合率43.3% → 42.1%，-2.8%差异）。

长期稳定性

-20℃冰箱存放6.3年：三组样本（储存2.7 ~ 6.3年）复测与基线的线性回归斜率0.917，R² = 0.936，仅23%低滴度样本因检测灵敏度出现波动（如结合率11.4% → 16.3%）。

反复冻融4次：21例样本中4例（19%）差异＞30%，但均为假阳性升高（如11.3% → 17.6%），无降解证据（p = 0.95，Wilcoxon秩和检验）。

方法细节补充

酸预处理：通过375 mM 乙酸（pH = 2.5）解离药物-ADA复合物，确保检测的是游离抗体，避免药物干扰。

放射性免疫分析（RIA）：使用放射性标记的胰岛素（抗原）与样本中的抗体结合，以%结合率（%B/T）表示滴度，灵敏度可达1% ~ 5% B/T。

统计方法：采用Wilcoxon秩和检验评估组间差异，结果显示不同储存条件下的样本稳定性无显著差异（α = 0.05）。

注：1）本研究中的结合率可类比常见方法中的滴度或S/N。2）复测误差以T0 作为分母计算。

研究二：多类生物药抗药抗体的“极限挑战”（礼来，2025）

统计方法：采用线性回归分析长期储存样本的稳定性，结果显示抗体滴度与储存时间无显著相关性（p = 0.87）。

讨论

两项研究对比抗药抗体

共同点：基质是ADA的“天然保护罩”，未稀释的临床样本比实验室合成的质控品更稳定。推测是血清中的白蛋白和IgG形成保护性微环境、抑制抗体聚集和降解。

给实验室的操作建议

作为生物分析实验室科学家，如何利用这些稳定性数据安排工作？

样本管理

胰岛素项目：短期储存室温3天或冰箱2周内的样本直接测，无需急冻；长期储存普通-20℃冰箱足够，冻融不超过4次。

生物药项目：短期储存37℃运输不超过3天，优先考虑4℃冷藏；长期储存必须-80℃；冻融最多8次。

检测“避坑”技巧

所有样本先“酸浴”处理（如0.1 M甘氨酸-HCl，pH = 2.0），破坏药物-抗体复合物，避免假阴性。

低滴度样本（如＜10%结合率）测3次，2次阳性才算真阳性，避免仪器波动误导结果。

合规性讨论

截至目前，美国FDA对于ADA样本稳定性并无明确规定。然而，对于一线实验人员，稳定性信息又是重要的信息之一。因此，总结与对比更多的ADA稳定性实验及其结果则显得尤为重要，也期待随着越来越多的稳定性数据得以积累，监管机构未来可以给出明确的指导意见。

结语：从“过度保护”到“科学信任”

这两项研究颠覆了“ADA脆弱易降解”的固有认知，证明血清中的抗体比我们想象中更稳定；对行业而言，意味着更低的冷链成本和更高效的研发流程。未来，随着更多数据积累，我们期待监管与实验室共同建立“基于风险”的样本管理标准，让科学证据驱动操作优化，而非“一刀切”的保守规则。

参考文献

[1]. Helene Solberg, Christina Bartholdy, Lone Hummelshoj Landsy, et al. Stability of anti-drug antibodies in human serum samples[J]. J Immunol Methods. 2024:525:113616.

[2]. Parul Sirohi, Kelly Hainline, Heather BullockSirohi, et al. Stability of Anti-Drug Antibodies Against Antibody Therapeutics[J]. AAPS J. 2025 Feb 15;27(1):45. 

本文适合生物药研发、免疫原性检测实验室及监管从业者参考，不构成实操建议，读者操作需结合具体项目要求及现行各监管机构要求开展。

本文由康维讯生物科学家翻译整理，读者如发现任何差异，应以原文为准。

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